Мясо пептонный бульон. Мясопептонный бульон

ГОСТ 20730-75

Группа Р35

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ

БУЛЬОН МЯСО-ПЕПТОННЫЙ (ДЛЯ ВЕТЕРИНАРНЫХ ЦЕЛЕЙ)

Технические условия

Nutrient media. Meat-pepton broth (for veterinary). Specifications*

______________
* Наименование стандарта. Измененная редакция, Изм. N 1 .
 

Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 9 апреля 1975 г. N 899 срок действия установлен с 01.01.1976 г. до 01.01.1981 г.*
________________
* Ограничение срока действия снято по протоколу N 4-93 Межгосударственного Совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС N 4, 1994 год). - Примечание изготовителя базы данных.

ПЕРЕИЗДАНИЕ. Август 1975 г.

ВНЕСЕНО Изменение N 1 , утвержденное и введенное в действие с 01.01.90 Постановлением Госстандарта СССР от 28.06.89 N 2194

Изменение N 1 внесено изготовителем базы данных по тексту ИУС N 11, 1989 год


Настоящий стандарт распространяется на мясо-пептонный бульон, представляющий собой питательный раствор, предназначенный для выращивания микроорганизмов.

1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1.1. Мясопептонный бульон должен изготавливаться в соответствии с действующим технологическим регламентом из мясной воды по ГОСТ 20729-75 с добавлением 1% пептона и 0,5% хлорида натрия в разведениях 1:1, 1:2 и 1:4.

1.2. Мясо-пептонный бульон по физико-химическим, биохимическим и биологическим показателям должен соответствовать требованиям и нормам, указанным в табл.1.

Таблица 1

1.1, 1.2. (Измененная редакция, Изм. N 1).

2. ПРАВИЛА ПРИЕМКИ

2.1. Мясо-пептонный бульон сдают и принимают сериями.

2.2. Каждая серия мясо-пептонного бульона на предприятиях биологической промышленности Министерства сельского хозяйства СССР должна быть принята государственным контролером Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР.

2.3. Под серией следует понимать любое количество мясо-пептонного бульона, изготовленное за один технологический цикл, в одной емкости (реакторе) и оформленное одним документом о качестве.

2.4. Для проверки качества препарата от каждой серии мясо-пептонного бульона более 50 л отбирают 2 л, при объеме менее 50 л - 0,6 л.

Если вся серия мясо-пептонного бульона расфасована в бутыли, делают выборку в количестве одной бутыли. Если мясо-пептонный бульон расфасован во флаконы, составляют выборку такого количества флаконов, чтобы объем мясо-пептонного бульона в отобранных флаконах соответствовал указанной выше норме, которая установлена в зависимости от общего объема серии мясо-пептонного бульона.

2.5. При получении неудовлетворительных результатов испытаний хотя бы по одному из показателей серию мясо-пептонного бульона считают не соответствующей требованиям настоящего стандарта.

2.6. Контрольную проверку образцов по требованию потребителя проводит Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР.

3. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ

3.1. Методы отбора проб

3.1.1. Пробу мясо-пептонного бульона в количестве 2 или 0,6 л (в зависимости от объема серии препарата) отбирают из реактора или бутыли стерильно.

Пробу объемом 2 л расфасовывают в 10 флаконов по 200 см. Пять флаконов используют для анализа, а пять - оставляют в архиве государственного контролера.

Пробу, отобранную от серии мясо-пептонного бульона объемом менее 50 л, в архиве не оставляют.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.2. Внешний вид, цвет, наличие механической примеси, плесени, хлопьев и осадка устанавливают, просматривая флаконы и бутыли с мясо-пептонным бульоном в проходящем свете, для чего флаконы встряхивают, переворачивая вниз пробками, а бутыли покачивают.

3.3. Запах мясо-пептонного бульона определяют в пробе органолептически.

3.4. Определение содержания общего азота

3.4.1. Аппаратура и реактивы



весы аналитические;

колбу Кьельдаля вместимостью 50-100 см по ГОСТ 25336-82 ;

аппарат микро-Кьельдаль;

элемент нагрева (плитку, горелку);

пипетки на 1, 2, 5 см по ГОСТ 20292-74 ;

бюретки по ГОСТ 20292-74 ;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72 ;

кислоту серную по ГОСТ 4204-77 , концентрированную и 0,1 н раствор;

натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328-77 , 30-33%-ный и 0,1 н растворы, приготовленные на предварительно прокипяченной дистиллированной воде;

перекись водорода по ГОСТ 10929-76 ;

метиловый красный;

метиленовую синь;

спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962-67 ;

метиловый оранжевый, 0,1%-ный раствор.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.4.2. Проведение испытания

Мясо-пептонный бульон в количестве 1 см помещают в колбу Кьельдаля и прибавляют 2 см концентрированной серной кислоты. В горло колбы вставляют стеклянный грушевидный баллончик или небольшую воронку с запаянным кончиком и минерализуют пробу сначала на слабом огне, затем степень нагрева усиливают, не допуская выбрасывания кипящей смеси в узкую часть колбы. Минерализацию проводят в присутствии катализатора - перекиси водорода. Катализатор добавляют после начала кипения по 0,5 см через каждые 15-20 мин до полного обесцвечивания раствора.

После охлаждения содержимое колбы переносят в колбу для отгона, добавляя 10-12 см дистиллированной воды. Полноту переноса проверяют по индикатору метиловому оранжевому. Последняя порция смывных вод должна остаться желтой.

В приемную колбу аппарата Кьельдаля наливают 20 см 0,1 н раствора серной кислоты и 2 капли индикатора Таширо. Индикатор Таширо готовят, растворяя 0,4 г метилового красного и 0,2 г метиленовой сини в 200 см 96%-ного этилового спирта.

Отгонную колбу присоединяют к холодильнику и парообразователю. Содержимое отгонной колбы нейтрализуют 30-33%-ным раствором гидрата окиси натрия по индикатору метиловому оранжевому. Отгон производят до тех пор, пока в приемной колбе соберется около 70 см раствора.

Содержимое приемной колбы титруют 0,1 н раствором гидрата окиси натрия до перехода окраски раствора от лилового к зеленому.

Одновременно ставят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо мясо-пептонного бульона в колбу для минерализации берут 1 см дистиллированной воды.

3.4.3. Обработка результатов

Содержание общего азота в мясо-пептонном бульоне () в процентах вычисляют по формуле

где - количество 0,1 н раствора серной кислоты, налитое в приемную колбу, см;

- поправочный коэффициент к титру 0,1 н серной кислоты;

- количество 0,1 н раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование испытуемой пробы, или в контрольном опыте, см;


- количество мясо-пептонного бульона, взятое на анализ, см;

0,0014 - количество азота, соответствующее 1 см 0,1 н раствора серной кислоты, г.

За окончательный результат испытания принимают разность между средними арифметическими двух параллельных определений в опытных и контрольных пробах. Допускаемые расхождения между результатами двух параллельных определений не должны превышать ±0,5%.

3.4.2, 3.4.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).

3.5. Определение содержания азота аминогрупп аминокислот и низших пептидов

3.5.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведения испытания применяют:

рН-метр;

стаканы лабораторные по ГОСТ 25336-82 ;

пипетки, бюретки по ГОСТ 20292-74 ;

формалин технический по ГОСТ 1625-75 ;

натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328-77 , 0,1 н раствор;

фенолфталеин, 1%-ный спиртовой раствор;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72 .

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.5.2. Подготовка к испытанию

Непосредственно перед проведением анализа готовят формольную смесь. Для этого к 50 см формалина добавляют 1 см 1%-ного раствора фенолфталеина и 0,1 н раствором гидрата окиси натрия доводят смесь до слаборозового цвета.

3.5.3. Проведение испытания

К 2 см мясо-пептонного бульона приливают 18 см дистиллированной воды и доводят 0,1 н раствором гидрата окиси натрия рН смеси до 7,0. Затем приливают 2 см формольной смеси и при постоянном перемешивании потенциометрически титруют 0,1 н раствором гидрата окиси натрия до рН 9,2.

Одновременно ставят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо 2 см мясо-пептонного бульона берут 2 см дистиллированной воды.

3.5.4. Обработка результатов

Содержание азота аминогрупп аминокислот и низших пептидов в мясо-пептонном бульоне () в процентах вычисляют по формуле

где - количество 0,1 н раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование испытуемой пробы, см;

- количество 0,1 н раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование в контрольном опыте, см;

- поправочный коэффициент к титру 0,1 н раствора гидрата окиси натрия;

0,0014 - количество азота, соответствующее 1 см 0,1 н раствора гидрата окиси натрия, г;

2 - количество мясо-пептонного бульона, взятое на анализ, см.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±0,2%.

3.5.2-3.5.4. (Измененная редакция, Изм. N 1).

3.6. Определение содержания пептонов

3.6.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведения испытания применяют:

фотоэлектроколориметр или спектрофотометр;

пипетки по ГОСТ 20292-74 ;

пробирки по ГОСТ 25336-82 ;

натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328-77 , 10%-ный раствор;

медь сернокислую по ГОСТ 4165-78 , 2%-ный раствор;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72 ;

центрифуги настольные типа ОПН-8-14,2.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.6.2. Подготовка к испытанию

3.6.2.1. При построении градуировочного графика по оси абсцисс откладывают концентрацию истинного пептона в процентах, по оси ординат - оптическую плотность () согласно данным, приведенным в табл.2.

Таблица 2

3.6.3. Проведение испытания

В пробирку наливают 10 см мясо-пептонного бульона в разведении 1:10, прибавляют по 1 см 10%-ного раствора гидрата окиси натрия и 2%-ного раствора сернокислой меди. Смесь после добавления каждого реактива хорошо встряхивают.

Одновременно проводят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо 10 см разведенного мясо-пептонного бульона берут 10 см дистиллированной воды.

Через 2 мин смесь центрифугируют 10 мин с частотой вращения 3000-4000. Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волн 540-560 нм или спектрофотометре при 540 нм в кюветах с рабочей длиной 10 мм.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.6.4. Обработка результатов

Концентрацию истинного пептона в мясо-пептонном бульоне определяют по градуировочному графику.

Оптическая плотность () мясо-пептонного бульона равна разности оптических плотностей в опыте с испытуемой пробой и в контрольном опыте. Полученную по графику концентрацию истинного пептона умножают на 10 (т.е. на разведение мясо-пептонного бульона).

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±5%.

3.7. Определение содержания сухого вещества

3.7.1. Аппаратура

Для проведения испытания применяют:

весы аналитические;

шкаф сушильный лабораторный;

эксикаторы по ГОСТ 25336-82 ;

стаканчики для взвешивания (бюксы) по ГОСТ 25336-82 ;

пипетки по ГОСТ 20292-74 .

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.7.2. Проведение испытания

В предварительно высушенную до постоянной массы бюксу взвешивают с погрешностью не более 0,0002 г мясо-пептонный бульон в количестве 1,0-1,2 г. Затем бюксу с мясо-пептонным бульоном высушивают в сушильном шкафу при температуре 100-105 °С до постоянной массы. Высушивание продолжают до тех пор, пока разность между двумя последующими взвешиваниями будет не более 0,0002 г.

Примечание. Увеличение массы при одном из взвешиваний в процессе высушивания при расчете не учитывают.

3.7.3. Обработка результатов

Содержание сухого вещества в мясо-пептонном бульоне () в процентах вычисляют по формуле

где - масса пустой бюксы с крышкой, г;

- масса бюксы с крышкой и с мясо-пептонным бульоном до высушивания, г;

- масса бюксы с крышкой и с мясо-пептонным бульоном после высушивания, г;

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать 0,2%.

3.8. Определение содержания бeлка (по методу Лоури)

3.8.1. Аппаратура и реактивы

Для проведения испытания применяют:

фотоэлектроколориметр;

пробирки стеклянные по ГОСТ 25336-82 ;

пипетки по ГОСТ 20292-74 ;

фильтры бумажные;

натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328-77 , 0,1 н. раствор;

натрий углекислый по ГОСТ 84-76 ;

натрий виннокислый или калий виннокислый двузамещенный, 1%-ный раствор;

медь сернокислую по ГОСТ 4165-78 ;

натрий вольфрамовокислый по ГОСТ 18289-78 ;

натрий молибденовокислый по ГОСТ 10931-74 ;

кислоту ортофосфорную 85%-ную;

кислоту соляную по ГОСТ 3118-67 *;
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ 3118-77 . - Примечание изготовителя базы данных.

литий сернокислый;

бром по ГОСТ 4109-79 ;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72 .

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.8.2. Подготовка к испытанию

Приготовление реактива А

Навеску углекислого натрия массой 2 г, взвешенную с погрешностью не более 0,02 г, растворяют в 100 см 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия. Если раствор мутный, то перед определением его надо профильтровать.

Приготовление реактива В

Навеску сернокислой меди массой 0,5 г, взвешенную с погрешностью не более 0,02 г, растворяют в 100 см 1%-ного раствора двузамещенного виннокислого натрия или калия. Если раствор мутный, то перед определением его надо профильтровать.

Приготовление реактива С

Реактив С готовят непосредственно перед определением путем смешивания 50 частей реактива А и 1 части реактива В.

Приготовление реактива Д

Реактив Д (реактив Фолина) готовят в круглодонной на 1 л колбе из огнеупорного стекла с обратным холодильником.

В колбу помещают 100 г вольфрамовокислого натрия, 25 г молибденовокислого натрия и 700 см дистиллированной воды. После полного растворения солей в колбу добавляют 50 см 85%-ной ортофосфорной кислоты и 100 см концентрированной соляной кислоты. Содержимое колбы осторожно, но хорошо перемешивают. К колбе присоединяют обратный холодильник и смесь кипятят (не слишком сильно) в течение 10 ч. Кипячение можно вести с перерывом, но учитывают лишь период кипения.

После окончания кипячения в смесь добавляют 150 г сернокислого лития, 50 см дистиллированной воды и 5 капель брома (осторожно). Для удаления излишка брома раствор кипятят 15 мин без холодильника под тягой. После охлаждения готовый раствор доводят в мерной колбе до 1 л, фильтруют через бумажный фильтр и хранят в темной склянке с притертой пробкой в темном месте. Реактив Д должен быть соломенно-желтого цвета без зеленого оттенка, затем в реактиве определяют концентрацию кислоты. Для этого приготовленный реактив разводят дистиллированной водой 1:10 (1 см реактива и 9 см воды) и титруют 0,1 н раствором гидрата окиси натрия по фенолфталеину (3-4 капли). Кислотность рассчитывают делением количества миллилитров 0,1 н. щелочи, израсходованного на титрование 1 см реактива Д, на 10. Реактив Д имеет кислотность 1,6-2,3 Н.

Приготовление реактива Е

Реактив Е является реактивом Д, разведенным до 1 н. раствора. Например, если реактив Д является 2,3 н раствором кислоты, то для приготовления 1 н раствора Е надо брать 10 см реактива Д и 13 см дистиллированной воды.

Построение градуировочного графика для определения белка

Готовят ряд растворов с определенным содержанием белка нисходящей концентрации от 0,10 до 0,01%, с которыми ставят цветную реакцию по п.3.8.3. Для приготовления растворов можно использовать альбумин, миозин, нативную сыворотку. Содержание белка в растворах определяют по Кьельдалю. Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре против воды. Из оптической плотности растворов белка вычитают оптическую плотность контроля на реактивы и полученную величину откладывают по оси ординат. По оси абсцисс откладывают концентрацию белка в растворе (в процентах или в миллиграммах).

Разведение исследуемого образца для постановки цветной реакции выбирают такое, чтобы основное количество замеров по величине оптической плотности лежало в пределах 0,2-0,8, где точность измерения наиболее высокая.

3.8.3. Проведение испытания

В пробирку наливают 1 см разведенного 1:10 мясо-пептонного бульона, добавляют 5 см реактива С, перемешивают и через 10 мин добавляют 0,5 см реактива Е. Одновременно ставят контроль на реактивы, для чего вместо мясо-пептонного бульона берут 1 см дистиллированной воды и добавляют те же реактивы, что и в пробирку с мясо-пептонным бульоном. Смесь хорошо перемешивают и ставят в темное место на 30-40 мин.

Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре с красным фильтром (630-640 нм) против воды в 5-миллиметровых кюветах. Из величин оптической плотности испытуемого образца вычитают величину оптической плотности контроля на реактивы. По полученным значениям оптической плотности растворов с помощью градуировочного графика определяют содержание белка в пробах. При расчете содержания белка в пробе учитывают кратность разведения перед постановкой цветной реакции.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±0,05%.

3.8.2, 3.8.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).

3.9. Определение содержания хлорида натрия

3.9.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведения испытания применяют:

весы аналитические;

элемент нагрева (горелку, плитку);

пипетки по ГОСТ 20292-74 ;

бюретки по ГОСТ 20292-74 ;

стаканы лабораторные по ГОСТ 25336-82 ;

квасцы железоаммонийные по ГОСТ 4205-77 , насыщенный раствор;

калий роданистый по ГОСТ 4139-75 или аммоний роданистый, 0,1 н раствор;

кислоту азотную по ГОСТ 4461-77 , концентрированную;

серебро азотнокислое по ГОСТ 1277-75 , 0,1 н раствор;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72 .

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.9.2. Проведение испытания

2 см мясопептонного бульона помещают в стакан, добавляют 20 см воды, 1 см концентрированной азотной кислоты и 10 см 0,1 н. раствора азотнокислого серебра.

Полученную смесь нагревают до начала кипения и быстро охлаждают путем погружения стакана в сосуд с водой комнатной температуры. После охлаждения к смеси добавляют 2 см насыщенного раствора железоаммонийных квасцов и титруют 0,1 н раствором роданистого калия (или роданистого аммония) до появления желтовато-розового окрашивания.

3.9.3. Обработка результатов

Содержание хлорида натрия в мясо-пептонном бульоне () в процентах вычисляют по формуле

где - количество 0,1 н раствора азотнокислого серебра, взятое в стакан с пробой, см;

- поправочный коэффициент к титру 0,1 н раствора азотнокислого серебра;

- количество 0,1 н раствора роданистого калия (или роданистого аммония), израсходованное на титрование испытуемой пробы, см;

- поправочный коэффициент к титру 0,1 н раствора роданистого калия (или роданистого аммония);

0,005844 - количество хлорида натрия, соответствующее 1 см 0,1 н раствора азотнокислого серебра;

- количество мясо-пептонного бульона, взятое на анализ, см.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±0,01%.

3.9.2, 3.9.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).

3.10. Определение концентрации водородных ионов (рН)

3.10.1. Аппаратура и материалы

Для проведения испытания применяют:

рН-метр;

стаканы лабораторные по ГОСТ 25336-82 ;

воронки стеклянные;

фильтры бумажные.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.10.2. Проведение испытания

Мясо-пептонный бульон фильтруют через бумажный фильтр и в прозрачном фильтрате определяют рН по инструкции, приложенной к рН-метру.

3.11. Определение стерильности

3.11.1. Аппаратура, материалы, реактивы

Для проведения испытания применяют:

термостат с температурой нагрева 37-38 °С;
фильтры бумажные; в пробирки, закрывают ватно-марлевыми пробками и пергаментными колпачками и стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин при 1,5 кгс/см.

3.11.3. Проведение испытания

Мясо-пептонный бульон (всю серию) в реакторе или в бутылях выдерживают в течение трех дней при комнатной температуре. Взятую стерильно пробу мясо-пептонного бульона расфасовывают по 100 см в четыре флакона вместимостью 200 см. Затем высевают мясо-пептонный бульон в пробирки с МПБ, МПА и МППБ. Посевы производят в 6-8 пробирок с каждой средой. Посев производят добавлением в каждую пробирку по 0,2 см испытываемого мясо-пептонного бульона. Пробирки и флаконы выдерживают в течение трех дней в термостате при температуре 37-38 °С. Среды в пробирках и мясо-пептонный бульон во флаконах должны оставаться стерильными.

3.11.2, 3.11.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).

3.11.4. Обработка результатов

При наличии роста микрофлоры в реакторе или бутылях серия мясо-пептонного бульона бракуется. При наличии роста микрофлоры во всех флаконах и пробирках серия мясо-пептонного бульона также бракуется.

При наличии роста микрофлоры в одном флаконе или в одной-двух пробирках контроль на стерильность повторяют на удвоенном количестве флаконов и пробирок. При повторном росте микрофлоры серию мясо-пептонного бульона бракуют.

3.12. Определение способности поддерживать рост микробов

3.12.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведения испытания применяют:

весы технические;

термостат;

автоклав;

рН-метр;

пипетки по ГОСТ 20292-74 ;

бюретки по

3.12.2. Подготовка к испытанию

Готовят согласно действующей рецептуре на основе испытуемого мясо-пептонного бульона мясо-пептонный агар, добавляя к бульону 2% микробиологического агара, и устанавливают рН среды 7,4.

Испытуемый мясо-пептонный бульон и приготовленный мясо-пептонный агар разливают по 8-10 см в пробирки, закрывают ватномарлевыми пробками и пергаментными колпачками и стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин при 1,5 кгс/см.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.12.3. Проведение испытания

Стерильный мясо-пептонный бульон и мясо-пептонный агар засевают суточными культурами: Staphylococcus aureus "Лассманов", Esherichia coli, штамм 675, Streptococcus faccalis, штамм 6783, полученными из Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских препаратов им. Л.А.Тарасевича. Посев каждой культуры производят пастеровской петлей в три пробирки с МПБ и в три пробирки с МПА. Инкубацию проводят в течение 24 ч в термостате при 37-38 °С.

Рост культуры должен быть типичным и обильным.

3.12.4. Обработка результатов

Типичность роста суточных культур определяют визуально и под микроскопом.

Интенсивность роста на МПА оценивают визуально, в МПБ - визуально и на фотоэлектроколориметре при длине волны 620-640 нм в кюветах с рабочей длиной 5 мм.

4. УПАКОВКА, МАРКИРОВКА, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ

______________
* Наименование раздела. Измененная редакция, Изм. N 1 .

4.1. Мясо-пептонный бульон стерильно расфасовывают в стеклянные бутыли (баллоны) вместимостью 10±0,5 и 20±1 л. Допускается более мелкая расфасовка - флаконы вместимостью 200 и 500 см.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

4.2. Бутыли закрывают стерильными резиновыми пробками, которые сверху завязывают пергаментной бумагой. Флаконы закрывают резиновыми пробками и закатывают алюминиевыми колпачками.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

4.3. На бутыли и флаконы наклеивают бумажные этикетки с указанием:

наименования препарата;

количества препарата, л;

номера серии препарата;

даты изготовления;

срока годности;

условий хранения;

обозначения настоящего стандарта.

4.4. Мясо-пептонный бульон хранят в реакторе или в бутылях в чистом, сухом и темном помещении при температуре 4-10 °C.

4.5. Мясо-пептонный бульон транспортируют всеми видами транспорта при соблюдении условий хранения, указанных в п.4.4. Допускается транспортирование при более высокой температуре, но не выше 18 °С, при этом срок транспортирования должен быть не более пяти суток.
.

ГОСТ 10394-72 введен взамен ГОСТ 10394-63 .

ГОСТ 10515-75 введен взамен ГОСТ 10515-63 .

ГОСТ 10931-74 введен взамен ГОСТ 10931-64 .

Электронный текст документа
подготовлен АО "Кодекс" и сверен по:
официальное издание
М.: Издательство стандартов, 1976

Мясо-пептонный бульон (МПБ). Для приготовления мясо-пептонных сред используют мясной бульон, который получают следующим образом: 500 г мелко изрубленного свежего мяса без костей, жира и сухожилий заливают в эмалированной кастрюле 1 л водопроводной воды, нагретой до 50°С, и оставляют настаиваться 12 ч при комнатной температуре или 1 ч при 50-55°С. Мясо отжимают, экстракт процеживают через марлю со слоем ваты, кипятят 30 мин для свертывания коллоидных белков и фильтруют дважды (первый раз через марлю с ватой, второй - через бумажный фильтр). Фильтрат доливают водой до 1 л, разливают в колбы, закрывают ватными пробками и стерилизуют при 120°С 20 мин (пробки колб закрывают сверху колпачками из бумаги). Ватные пробки должны быть плотными, так как они служат фильтром, препятствующим проникновению бактерий из воздуха после стерилизации.

Мясной бульон может быть использован в любое время для приготовления соответствующих сред. Если их готовят сразу, то предварительная стерилизация мясного бульона не требуется.

Нередко в лабораторных условиях мясной настой кипятят вместе с мясом, затем мясо отжимают. При этом бульон получается хорошего качества. При потребности в мясном бульоне особо высокой питательности во время настаивания мяса с водой добавляют немного пепсина и подкисляют бульон соляной кислотой. Пепсин способствует дополнительной гидролизации белковых соединений мяса, и в результате количество доступных бактериям питательных веществ возрастает. Мясо можно заменить мясным экстрактом (5 г на 1 л среды).

Для приготовления МПБ к 1 л мясного бульона добавляют 5-10 г пептона (первый продукт гидролиза белка) для повышения калорийности среды и 5 г поваренной соли для создания осмотической активности. Среду нагревают до растворения пептона, постоянно помешивая.

Затем устанавливают нейтральную или слабощелочную реакцию среды, приливая 20%-ный раствор Na 2 CO 3 до посинения влажной красной лакмусовой бумажки. Дли проверки рН среды удобно использовать индикатор бромтимолблау: 1-2 капли его смешивают в фарфоровой чашке с каплей бульона. В нейтральной среде бромтимолблау - бутылочно-зеленый, в кислой - желтый, в щелочной - синий.

После установления рН среду снова кипятят 5-10 мин, и белки, свернувшиеся при изменении реакции среды, отфильтровывают через бумажный фильтр без осветления бульона или осветлив его белком. Для этого свежий яичный белок взбивают с двойным по объему количеством воды и смешивают с охлажденным до 50 °С бульоном. Смесь кипятят, помешивая, на слабом огне 10 мин, затем фильтруют. Прозрачный мясо-пептонный бульон разливают в пробирки, закрывают ватными пробками и стерилизуют при 120 °С 20 мин.

Мясо-пептонный агар (МПА). К 1 л МПБ добавляют 15- 20 г агара. Среду нагревают до растворения агара (температура его плавления - 100 °С, затвердевания - 40 °С), устанавливают слабощелочную реакцию среды 20%-ным раствором Na 2 CO 3 и через воронку разливают в пробирки (приблизительно по 10 мл агара столбиком для последующего разлива по чашкам Петри и по 5 мл для получения скошенного агара - косяков).

При разливе агара необходимо следить за тем, чтобы края пробирок оставались сухими, иначе пробки прилипнут к стеклу. Пробирки со средой стерилизуют в автоклаве при 120 °С 20 мин.

Мясо-пептонная желатина (МПЖ). В 1 л МПБ помешают 100-150 г желатины. Температура плавления желатины зависит от ее содержания в среде: в случае 10%-ной концентрации в среде она плавится при 24 °С; в случае 15%-ной - при 25 °С. В летнее время среды готовят, добавляя 15% желатины.

После растворения желатины при осторожном нагревании устанавливают слабощелочную реакцию среды (как для МПБ и МПА), кипятят 5 мин, затем охлаждают до 40-50 °С. Взбитый, с небольшим количеством воды яичный белок вливают в охлажденную желатиновую среду, хорошо взбалтывают и снова нагревают. Среда после выпадения белков в осадок становится прозрачной. Ее фильтруют в горячем виде через бумажный фильтр, разливают в пробирки и стерилизуют в кипятильнике Коха текучим паром, прогревая среду 3 раза по 30 мин каждые 24 ч.

Картофельный агар. Нарезают ломтиками 200 г очищенного и промытого водой картофеля, заливают 1 л водопроводной воды, варят 30 мин. Отвар фильтруют через вату и добавляют воду до первоначального объема. К полученной жидкости прибавляют 2% агара, кипятят до его расплавления и устанавливают нейтральную реакцию среды (рН = 7). Среду стерилизуют 20 мин при 1 атм 1 .

Пивное сусло и сусло-агар. Зерна ячменя замачивают в холодной воде и проращивают при 35 °С. После того как ростки станут вдвое длиннее зерен, последние высушивают до воздушно-сухого состояния (можно при слабом подогревании), получая солод. Для приготовления сусла солод крупно размалывают и смешивают с водой (250 г солода на 1 л воды). Для лучшего выделения фермента амилазы смесь подогревают при 57 °С до исчезновения реакции на крахмал (синего окрашивания с иодом). Пробы на осахаривание крахмала проводят в фарфоровой чашке в капле жидкости.

Сусло процеживают через вату, затем фильтруют через бумажный фильтр. Такое сусло содержит 10-20% сахара. Точное его содержание определяют по плотности раствора при помощи сахариметра. Сусло разбавляют водой до концентрации сахара 6-8% и стерилизуют 30 мин при 115 °С и давлении 0,5 атм. Готовое сусло можно получить на пивоваренном заводе.

Для приготовления сусло-агара к пивному суслу добавляют 2,5-3% агара, кипятят до расплавления, фильтруют через вату и стерилизуют при тех же условиях, как и пивное сусло.

Обезжиренное молоко. Для приготовления питательных сред используют снятое молоко, так называемый обрат, так как жир в молоке неблагоприятно влияет на рост некоторых микроорганизмов. Обрат получают сепарированием молока, нагретого до 34 °С. Можно удалять жир и при отстаивании молока.

При стерилизации следует помнить о том, что молоко нельзя длительное время выдерживать в автоклаве, так как лактоза (молочный сахар), содержащаяся в молоке, может карамелизоваться.

Обезжиренное молоко разливают в стерильные пробирки и выдерживают при 115 °С (давление 0,5 атм) 10 мин. Перед стерилизацией кислотность обрата не должна превышать 22° Тернера, иначе молоко свернется. После стерилизации его выдерживают 3 сут в термостате при 30°С. чтобы спровоцировать развитие спорообразующих и других стойких к нагреванию форм. Через 3 сут пробирки с молоком просматривают и те, в которых развились микроорганизмы, выбраковывают.

При стерилизации в автоклаве иногда возможно побурение молока вследствие карамелизации молочного сахара и пептонизании казеина. При длительной стерилизации на дно пробирки выпадает осадок казеина, который может частично пептонизироваться. Перегретoe побуревшее молоко в качестве среды использовать нельзя.

Дрожжевые среды. Дрожжевая вода. 50-100 г сухих дрожжей разводят в 1 л воды, кипятят 10 мин, фильтруют через бумажный фильтр и стерилизуют текучим паром по 30 мин в течение 3 дней ежедневно.

Дрожжевой автолизат. 200 г прессованных дрожжей разводят в 1 л воды; добавляют 2 г Na 2 HPO 4 , каплями I н. раствор NaOH (до рH 6,1) и 5 мл хлороформа, выдерживают при 37 °С 2 сут, доводят раствором NaOH до рН 7,4, кипятят 30 мин. фильтруют через бумажный фильтр, разливают в посуду и стерилизуют при 115 °С 30 мин.

Дрожжевой экстракт. 1 кг прессованных дрожжей разводят в 1 л воды, смесь кипятят 1 ч, трижды отфильтровывают через бумажный фильтр и стерилизуют при 115 °С 30 мин.

Бобовый отвар. 50 г фасоли (лучше белой) заливают 1 л водопроводной воды и варят до готовности так, чтобы бобы не разварились. Полученный отвар фильтруют через вату, добавляют к нему 10 г сахара и доводят до первоначального объема. Устанавливают слабощелочную реакцию среды, разливают в колбы и стерилизуют в автоклаве 30 мин при давлении пара 1,5 атм.

1 По системе СИ давление принято выражать в паскалях (Па): 1 атм = 1,01325 х 10 5 Па = 0,1 МПа.

стр. 1

стр. 2

стр. 3

стр. 4

стр. 5

стр. 6

стр. 7

стр. 8

стр. 9

стр. 10

стр. 11

стр. 12

стр. 13

стр. 14

стр. 15

стр. 16

стр. 17

стр. 18

Цена 5 коп.

Издание официальное

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СТАНДАРТОВ СОВЕТА МИНИСТРОВ СССР

РАЗРАБОТАН Всесоюзным Государственным научно-контрольным институтом ветеринарных препаратов

Директор Бойко А. А.

Руководитель темы: Простяков А. П.

Исполнители темы: Агапова 3. А., Цыганкова С. И., Голикова Г. А.

ВНЕСЕН Министерством сельского хозяйства СССР

Член коллегии Третьяков А. Д.

ПОДГОТОВЛЕН К УТВЕРЖДЕНИЮ Всесоюзным научно-исследовательским институтом стандартизации (ВНИИС)

Директор Гличев А. В.

УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 9 апреля 1975 г. № 899

доводят в мерной колбе до 1 л, фильтруют через бумажный фильтр и хранят в темной склянке с притертой пробкой в темном месте. Реактив Д должен быть соломенно-желтого цвета без зеленого оттенка, затем в реактиве определяют концентрацию кислоты. Для этого приготовленный реактив разводят дистиллированной водой 1: 10 (1 мл реактива и 9 мл воды) и титруют 0,1 н. раствором гидрата окиси натрия по фенолфталеину (3-4 капли). Кислотность рассчитывают делением количества миллилитров 0,1 н. щелочи, израсходованного на титрование 1 мл реактива Д, на 10. Реактив Д имеет кислотность 1,6-2,3 Н.

Приготовление реактива Е

Реактив Е является реактивом Д, разведенным до 1 н. раствора. Например, если реактив Д является 2,3 н. раствором кислоты, то для приготовления 1 н. раствора Е надо брать 10 мл реактива Д и 13 мл дистиллированной воды

Построение градуировочного графика для определения белка

Готовят ряд растворов с определенным содержанием белка нисходящей концентрации от 0,10 до 0,01%, с которыми ставят цветную реакцию по п. 3.8.3. Для приготовления растворов можно использовать альбумин, миозин, нативную сыворотку. Содержание белка в растворах определяют по Кьельдалю. Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре против воды Из оптической плотности растворов белка вычитают оптическую плотность контроля на реактивы и полученную величину откладывают по оси ординат. По оси абсцисс откладывают концентрацию белка в растворе (в процентах или в миллиграммах).

Разведение исследуемого образца для постановки цветной реакции выбирают такое, чтобы основное количество замеров по ве личине оптической плотности лежало в пределах 0,2-0,8, где точность измерения наиболее высокая.

3.8 3. Проведение испытания

В пробирку наливают 1 мл разведенного 1: 10 мясо-пептонного бульона, добавляют 5 мл реактива С, перемешивают и через 10 мин добавляют 0,5 мл реактива Е. Одновременно ставят конт роль на реактивы, для чего вместо мясо-пептонного бульона берут 1 мл дистиллированной вэды и добавляют те же реактивы, что и в пробирку с мясо-пептонным бульоном. Смесь хорошо перемешивают и ставят в темное место на 30-40 мин.

Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре с красным фильтром (630-640 нм) против воды в 5-миллиметро-вых кюветах. Из величин оптической плотности испытуемого образца вычитают величину оптической плотности контроля на реактивы. По полученным значениям оптической плотности растворов с помошью градуировочного графика определяют содержание бел-

ка в пробах. При расчете содержания белка в пробе учитывают кратность разведения перед постановкой цветной реакции.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±0,05%.

3.9. О п р е д е л е н и е содержания хлорида натрия

3.9.1. Аппаратура, материалы и реактивы Для проведения испытания применяют: весы аналитические;

элемент нагрева (горелку, плитку); пипетки по ГОСТ 1770-64 ; бюретки по ГОСТ 1770-64 ; стаканы лабораторные по ГОСТ 10394-63 ; квасцы железоаммонийные по ГОСТ 4205-68 , насыщенный ра~ створ;

3.9.2. Проведение испытания

Мясо-пептонный бульон в количестве 20 мл помещают в стакан и добавляют 1 мл концентрированной азотной кислоты и 10 мл 0,1 н. раствора азотнокислого серебра.

Полученную смесь нагревают до начала кипения и быстро охлаждают путем погружения стакана в сосуд с водой комнатной температуры. После охлаждения к смеси добавляют 2 мл насыщенного раствора железоаммонийных квасцов и титруют 0,1 н. раствором роданистого калия (или роданистого аммония) до появления желтовато-розового окрашивания.

3.9.3. Обработка результатов

(У к -У г К х) 0,005844-100

где V - количество 0,1 н. раствора азотнокислого серебра, взя* тое в стакан с пробой, мл;

К - поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора азотнокислого серебра;

Vi - количество 0,1 н. раствора роданистого калия (или роданистого аммония), израсходованное на титрование испытуемой пробы, мл;

К\ - поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора роданистого калия (или роданистого аммэния);

0,005844 - количество хлэрида натрия, соответствующее 1 мл 0,1 н. раствора азотнокислого серебра;

V 2 - количество мясо-пептонного бульона, взятое на анализ, мл.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±0,01%.

3.10. Определение концентрации водородных ионов (pH)

3.10.1. Аппаратура и материалы

Для проведения испытания применяют: рН-метр;

воронки стеклянные;

пробки ватномарлевые;

фильтры бумажные;

ГОСТ 13805-68 ГОСТ 17206-71 .

3.11.2. Подготовка к испытанию

Готовят в соответствии с действующей рецептурой, мясо-пептонный бульон (МПБ), мясо-пептонный агар (МПА) и мясо-пептон-ный-печеночный бульон (МППБ) под маслом (среда Кип-Тар оц-ци). Среды разливают по 8-10 мл в проблрки, закрывают ватномарлевыми пробками и пергаментными колпачками и стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин при 1,5 кгс/см 2 .

3.11.3. Проведение испытания

Мясо-пептонный бульон (всю серию) в реакторе или в бутылях выдерживают в течение трех дней при комнатной температуре.

Взятую стерильно пробу мясо-пептонного бульона расфасовывают по 100 мл в четыре флакона вместимостью 200 мл. Затем высевают мясо-пептонный бульон в пробирки с МПБ, МПА и МППБ. Посевы производят в 6-8 пробирок с каждой средой. Посев производят добавлением в каждую пробирку по 0,2 мл испытываемого мясо-пептонного бульона. Пробирки и флаконы выдерживают в течение трех дней в термостате при температуре 37-38°С. Среды в пробирках и мясо-пептонный бульон во флаконах должны оставаться стерильными.

3.11.4. Обработка результатов

При наличии роста микрофлоры в реакторе или бутылях серия мясо-пептонного бульона бракуется. При наличии роста микрофлоры во всех флаконах и пробирках серия мясо-пептонного бульона также бракуется.

При наличии роста микрофлоры в одном флаконе или в одной-двух пробирках контроль на стерильность повторяют на удвоенном количестве флаконов а пробирок. При повторном росте микрофлоры серию мясо-пептонного бульона бракуют.

3.12. Определение способности поддерживать рост микробов

3.12.1. Аппаратура, материалы и реактивы Для проведения испытания применяют: весы технические;

термостат;

автоклав;

воронки стеклянные;

пробки ватномарлевые;

фильтры бумажные;

пептон сухой ферментативный по ГОСТ 13805-68 ; агар микробиологический по ГОСТ 17206-71 .

3.12.2. Подготовка к испытанию

Готовят согласно действующей рецептуре на основе испытуемого мясо-пептонного бульона мясо-пептонный агар, добавляя к бульону 2% микробиологического агара, и устанавливают pH среды 7,4.

Испытуемый мясо-пептонный бульон и приготовленный мясо-пептонный агар разливают по 8-10 мл в пробирки, закрывают ватномарлевыми пробками и пергаментными колпачками и стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин при 1,5 кгс/см 2 .

3.12.3. Проведение испытания

Стерильный мясо-пептонный бульон и мясо-пептонный агар засевают суточными культурами: Staphylococcus aureus «Лассма-нов», Esherichia coli, штамм 675, Streptococcus faccalis, штамм 6783, полученными из Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских препаратов им. Л. А. Тарасевича. Посев каждой культуры производят пастеровской петлей в три пробирки с МПБ и в три пробирки с МПА. Инкубацию проводят в течение 24 ч в термостате при 37-38°С.

Рост культуры должен быть типичным и обильным.

3.12.4. Обработка результатов

Типичность роста суточных культур определяют визуально и под микроскопом.

Интенсивность роста на МПА оценивают визуально, в МПБ - визуально и на фотоэлектроколориметре при длине волны 620- 640 нм в кюветах с рабочей длиной 5 мм.

4. РАСФАСОВКА, УПАКОВКА, МАРКИРОВКА, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ

4.1. Мясо-пептонный бульон стерильно расфасовывают в стеклянные бутыли (баллоны) вместимостью 10±0,5 и 20±1 л. Допускается более мелкая расфасовка - флаконы вместимостью 200 и 500 мл.

4.2. Бутыли закрывают стерильными резиновыми пробками по ГОСТ 7852-65 , которые сверху завязывают пергаментной бумагой. Флаконы закрывают резиновыми пробками и закатывают алюминиевыми колпачками.

4.3. На бутыли и флаконы наклеивают бумажные этикетки с указанием:

наименования препарата;

количества препарата в л;

номера серии препарата;

даты изготовления;

срока годности;

условий хранения;

обозначения настоящего стандарта.

4.4. Мясо-пептонный бульон хранят в реакторе или в бутылях в чистом, сухом и темном помещении при температуре 4-10°С.

4.5. Мясо-пептонный бульон транспортируют всеми видами транспорта при соблюдении условий хранения, указанных в п. 4.4. Допускается транспортирование при более высокой температуре, но не выше 18°С, при этом срок транспортирования должен быть не более пяти суток.

4.6. Срок годности мясо-пептонного бульона 6 месяцев со дня изготовления. По истечении указанного срока мясо-пептонный бульон подвергают испытанию и в случае соответствия требованиям, установленным настоящим стандартом, срок годности может быть продлен еще на 3 месяца.

Редактор Я. Е. Шестакова Технический редактор В. Ю. Смирнова Корректор И. Л, Хиниц

Сдано в наб. 18 04 75 Подп. в печ. 25 05 75 1,0 п. л. Тир. 6000 Цена 5 коп.

Издательство стандартов. Москва, Д-22, Новопресненский пер., 3 Тип. «Московский печатник». Москва, Лялин пер.. 6. Зак. 683

Пункты 3.4.1, 35.1, 3.6 1, 3.7.1, 38 1, 3.9 1, 3.11.1, 3 12 1. Заменить ссылку ГОСТ 1770-64 на ГОСТ 1770-74 .

Пунмы 3 1 I, 3.5.1, 3.9.1, 3 10.1. Заменить ссылку: ГОСТ 10394-63 на ГОСТ 25336_82

Пункты 3.4.1, 3.5.1, 3.6.1, 3.8.1. Заменить ссылку: ГОСТ 4328-66 на ГОСТ 4328-77 .

Пункты 3.6.1, 3.8.1, 3.11.1, 3.12.1. Заменить ссылку: ГОСТ 10515-75 на ГОСТ 25336_82

Пункт 3.6.1. Исключить слова: «фильтры бумажные», «воронки стеклянные по ГОСТ 8613-64 »;

дополнить абзацем: «центрифуги настольные типа ОПН-8-14,2».

Пункт 3.6.3. Третий абзац. Заменить слова: «Через 2 мин смесь фильтруют через бумажные фильтры» на «Через 2 мин смесь центрифугируют 10 мин с частотой вращения 3000 -4000- 1 ».

Пункт 3.9.2. Второй абзац изложить в новой редакции: «2 см 3 мясопептон-ного бульона помещают в стакан, добавляют 20 см* воды, 1 см 3 концентрированной азотной кислоты и 10 см 3 0,1 н. раствора азотнокислого серебра».

Пункт 3.9.3. Формулу изложить в новой редакции:

(VK-V X K X) 0,005844 100 Х 3 - Vt

Пункты 3.11.1, 3.12.1. Заменить ссылки: ГОСТ 13805-68 на ГОСТ 13805-76 , ГОСТ 17206-71 на ГОСТ 17206-84 .

Раздел 4. Наименование. Исключить слово: «расфасовка».

(ИУС № 11 1989 г.)

УДК 576.8.093.1(083.74) Группа Р35

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ. БУЛЬОН МЯСО-ПЕПТОННЫЙ (ДЛЯ ВЕТЕРИНАРНЫХ ЦЕЛЕЙ)

Meat-pep ton broth (for veterinary)

Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 9 апреля 1975 г. Нй 899 срок действия установлен

с 01.01 1976 г. до 01.01 1981 г.

Несоблюдение стандарта преследуется по закону

Настоящий стандарт распространяется на мясо-пептонный бульон, представляющий собой питательный раствор, предназначенный для выращивания микроорганизмов.

1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1.1. Мясо-пептонный бульон должен изготавливаться в соответствии с действующими правилами по ведению технологического процесса, утвержденными в установленном порядке.

1.2. Мясо-пептонный бульон по физико-химическим, биохимическим и биологическим показателям должен соответствовать требованиям и нормам, указанным в табл. 1.

Таблица I

Продолжение

Характеристика и нормы

Наименования показателей

Стерильность

2,7 3,0-3,4 0,5 0,5 7,2-7,6

Посев на питательные среды не должен давать роста микрофлоры в течение трех суток в термостате при 37- 38°С

Способность поддерживать рост микробов, оптическая плотность, не менее.

Staphylococcus aureus «Лассма-нов»

Escherichia со И штамм 675

Streptococcus faccalis штамм 6783

2. ПРАВИЛА ПРИЕМКИ

2.1. Мясо-пептонный бульон сдают и принимают сериями.

2.2. Каждая серия мясо-пептонного бульона на предприятиях биологической промышленности Министерства сельского хозяйства СССР должна быть принята государственным контролером Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР.

2.3. Под серией следует понимать любое количество мясо-пептонного бульона, изготовленное за один технологический цикл, в одной емкости (реакторе) и оформленное одним документом о качестве.

2.4. Для проверки качества препарата от каждой серии мясо-пептонного бульона более 50 л отбирают 2 л, при объеме менее 50 л - 0,6 л.

Если вся серия мясо-пептонного бульона расфасована в бутыли, делают выборку в количестве одной бутыли. Если мясо-пептонный бульон расфасован во флаконы, составляют выборку такого количества флаконов, чтобы объем мясо-пептонного бульона в отобранных флаконах соответствовал указанной выше норме, которая установлена в зависимости от общего объема серии мясо-пептонного бульона.

2.5. При получении неудовлетворительных результатов испытаний хотя бы по одному из показателей серию мясо-пептонного

бульона считают не соответствующей требованиям настоящего стандарта.

2.6. Контрольную проверку образцов по требованию потребителя проводит Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР.

3. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИИ

3.1. Методы отбора проб

3.1.1. Пробу мясо-пептонного бульона в количестве 2 или 0,6 л (в зависимости от объема серии препарата) отбирают из реактора или бутыли стерильно.

Пробу объемом 2 л расфасовывают в 10 флаконов по 200 мл. Пять флаконов используют для анализа, а пять - оставляют в архиве государственного контролера.

Пробу, отобранную от серии мясо-пептонного бульона объемом менее 50 л, в архиве не оставляют.

3.2. Внешний вид, цвет, наличие механической примеси, плесени, хлопьев и осадка устанавливают, просматривая флаконы и бутыли с мясо-пептонным бульоном в проходящем свете, для чего флаконы встряхивают, переворачивая вниз пробками, а бутыли покачивают.

3.3. Запах мясо-пептонного бульона определяют в пробе органолептически

3.4. Определение содержания общего азота

3.4.1. Аппаратура и реактивы

Для проведения испытания применяют: весы аналитические;

колбу Кьельдаля вместимостью 50-100мл по ГОСТ 10394-63 ; аппарат микро-Кьельцаль; элемент нагрева (плитку, горелку); пипетки на 1, 2, 5 мл по ГОСТ 1770-64 ; бюретки по ГОСТ 1770-64 ; воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72 ; кислоту серную по ГОСТ 4204-66 , концентрированную и 0,1 н. раствор;

За окончательный результат испытания принимают разность между средними арифметическими двух параллельных определений в опытных и контрольных пробах. Допускаемые расхождения между результатами двух параллельных определений не должны превышать ±0,5%.

3.5. О п р е д е л е н и е содержания азота аминогрупп аминокислот и низших пептидов

3.5.1. Аппаратура, материалы и реактивы Для проведения испытания применяют: рН-метр;

3.5.2. Подготовка к испытанию

Непосредственно перед проведением анализа готовят формоль-ную смесь. Для этого к 50 мл формалина добавляют 1 мл 1%-ного раствора фенолфталеина и 0,1 н. раствором гидрата окиси натрия доводят смесь до слаборозового цвета.

3.5.3. Проведение испытания

К 2 мл мясо-пептонного бульона приливают 18 мл дистиллированной воды и доводят 0,1 н. раствором гидрата окиси натрия pH смеси до 7,0. Затем приливают 2 мл формольной смеси и при постоянном перемешивании потенциометрически титруют 0,1 н. раствором гидрата окиси натрия до pH 9,2.

Одновременно ставят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо 2 мл мясо-пептонного бульона берут 2 мл дистиллированной воды.

3.5.4. Обработка результатов

v (V-V\) * К 0,0014.100

где V - количество 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование испытуемой пробы, мл;

Vj - количество 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование в контрольном опыте, мл;

К - поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия;

0,0014 - количество азота, соответствующее 1 мл 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия, г;

2 - количество мясо-пептонного бульона, взятое на анализ, мл.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±0,2%.

3.6.3. Проведение испытания

В пробирку наливают 10 мл мясо-пептонного бульона в разведении 1: 10, прибавляют по 1 мл 10%-ного раствора гидрата окиси натрия и 2%-ного раствора сернокислой меди. Смесь после добавления каждого реактива хорошо встряхивают.

Одновременно проводят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо 10 мл разведенного мясо-пептонного бульона берут 10 мл дистиллированной воды.

Через 2 мин смесь фильтруют через бумажные фильтры. Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волн 540-560 нм или спектрофотометре при 540 нм в кюветах с рабочей длиной 10 мм.

3.6.4. Обработка результатов

Концентрацию истинного пептона в мясо-пептонном бульоне определяют по градуировочному графику.

Оптическая плотность (Е) мясо-пептонного бульона равна разности оптических плотностей в опыте с испытуемой пробой и в

контрольном опыте. Полученную по графику концентрацию истинного пептона умножают на 10 (т. е. на разведение мясо-пептонного бульона).

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±5%.

3.7. О п р е д е л е н и е содержания сухого вещества

3.7.1. Аппаратура

Для прозедения испытания применяют:

весы аналитические;

шкаф сушильный лабораторный по ГОСТ 7365-55 ;

стаканчики для взвешивания (бюксы) по ГОСТ 7148-70 ;

3.7.2. Проведение испытания

В предварительно высушенную до постоянной массы бюксу взвешивают с погрешностью не более 0,0002 г мясо-пептонный бульон в количестве 1,0-1,2 г. Затем бюксу с мясо-пептонным бульоном высушивают в сушильном шкафу при температуре 100-105°С до постоянной массы. Высушивание продолжают до тех пор, пока разность между двумя последующими взвешиваниями будет не более 0,0002 г.

Примечание. Увеличение массы при одном из взвешиваний в процессе высушивания при расчете не учитывают.

3.7.3. Обработка результатов

уг _ (т 2 - т) 100

где т - масса пустой бюксы с крышкой, г;

Ш\ - масса бюксы с крышкой и с мясо-пептонным бульоном до высушивания, г;

1%-ный раствор; медь сернокислую по

Реактив С готовят непосредственно перед определением путем смешивания 50 частей реактива А и 1 части реактива В. Приготовление реактива Д

Реактив Д (реактив Фолина) готовят в круглодонной на 1 л колбе из огнеупорного стекла с обратным холодильником.

В колбу помещают 100 г вольфрамовокислого натрия, 25 г молибденовокислого натрия и 700 мл дистиллированной воды. После полного растворения солей в колбу добавляют 50 мл 85%-ной ортофосфорной кислоты и 100 мл концентрированной соляной кислоты. Содержимое колбы сстсрожно, но хорошо перемешивают. К колбе присоединяют обратный холодильник и смесь кипятят (не слишком сильно) в течение 10 ч. Кипячение можно вести с перерывом, но учитывают лишь период кипения.

После окончания кипячения в смесь добавляют 150 г сернокислого лития, 50 мл дистиллированной воды и 5 капель брома (осторожно). Для удаления излишка брома раствор кипятят 15мин без холодильника под тягой. После охлаждения готовый раствор

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 50,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин.

Принцип и оценка результата:

На этой среде обильный рост дают многие бактерии. Ее рекомендуют для получения больших количеств микробной массы в ходе получения вакцины или токсина.

Эта среда по своему составу подобна Среде с мясным экстрактом (АТСС Medium 225). Пептический перевар животной ткани и настой говядины обеспечивают присутствие в среде азота, серы, витаминов и других веществ, необходимых для получения обильного роста микроорганизмов. Натрия хлорид обеспечивает изотоничность среды.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 2,5%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет желтую окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (5,0% вес/об) имеет рН 7,5 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-48 ч при 35°С.

К 1000 мл мясопептонного бульона перед стерилизацией добавляют 20 г агара и кипятят на слабом огне при постоянном помешивании до полного растворения.

Мясопептонный агар, охлажденный до температуры 50- - 55° С, осветляют яичным белком (из расчета один белок на 1000 мл мясопептонного агара), по­мешают в автоклав, не завинчивая крышку автоклава, или в аппарат Коха на 1 ч чтобы белок свернулся и, оседая, увлек за собой взвешенные частицы. Горя­чий Мясопептонный агар фильтруют через ватно-марлевый фильтр, устанавли­вают в нем рН 7,0-7,4, разливают во флаконы или пробирки и 20 мин стерили­зуют в автоклаве при температуре 120° С.

Мясопептонный желатин

К мясопептонному бульону прибавляют мелко нарезанный желатин из расче­та ю-15 г на 100 мл. После набухания желатин растворяют при медленном нагревании в водяной бане при температуре 40-45 °С, устанавливают рН=7,0 10%-ным раствором бикарбоната натрия, фильтруют через бумажный фильтр в горячем виде. Среду разливают в пробирки по 5-8 мл, стерилизуют дробно 3 дня по часу при температуре 100° С или однократно при 110° С в течение 20 мин. После стерилизации среду охлаждают.

Пептонная вода

К 1000 мл дистиллированной воды добавляют 10 г пептона и 5 г хлористого натрия, кипятят до растворения пептона, фильтруют и устанавливают рН 7,2- 7,4, после чего стерилизуют 30 мин при температуре 120° С.

Элективные среды для выявления возбудителей пищевых то кс и ко инфекций Среды фуксин - сульфитный агар (среда Эндо), бакто-агар Плоскирева, ме-тилен-эозиновая среда Левина, висмут-сульфит агар (среда Вильсон-Блера) го­товят из сухих стандартных сред по прописи, указанной на этикетке.

Среда Смирнова

К 1 л расплавленного МП А добавить 10-12 г лактозы и 4-5 мл 1,2% рас­твора бромкрезолпурпур. Стерилизовать дробно (или при 0,5 атм 20 мин).

Среды накопления сальмонелл Среда Мюллера Для приготовления среды Мюллера готовят вначале растворы серноватисто-кислого натрия и Люголя.

В мерный цилиндр с 50 г серноватистокислого натрия добавляют до 100 мл Дистиллированной воды. Раствор переливают в бутыль и стерилизуют текучим паром в течение 30 мин.

Для приготовления среды Мюллера в стерильные флаконы помещают по 4,5 г мела и стерилизуют их сухим паром в течение 1 ч. Затем наливают в каждый флакон по 90 мл бульона из перевара Хоттингера, содержащего 130- 150 мг % азота, устанавливают рН 7,2-7,4 и стерилизуют 30 мин при температуре

120°С После стерилизации вновь устанавливают рН 7,2-7,4, для чего прове­ряют в одном из флаконов и определяют необходимый для подтитровки дан­ного количества среды объем соляной кислоты или гидрата окиси натрия. Затем в асептических условиях перед употреблением добавляют по 2 мл раствора Лю-голя и по 10 мл раствора серноватистокислого натрия.

Таблица 1 Рост возбудителей пищевых токсикоинфекций на элективных средах и МПА

Главная » Вторые блюда » Мясо пептонный бульон. Мясопептонный бульон